Kete Tangohanga DNA/RNA Viral
He pai tenei kete mo te tango tere o te DNA / RNA viral tino parakore mai i nga tauira penei i te nasopharyngeal swabs, swabs taiao, supernatants culture cell, and tissue homogenate supernatants.Ko te kete kei runga i te hangarau purei kirikiri kirikiri e whakakore ana i te hiahia mo te whakamahi i te phenol/chloroform whakarewa pararopi, te rerenga waipiro ranei ki te tango i te DNA/RNA viral o te kounga teitei.Ko nga waikawa karihi karekau he poke me te reri mo te whakamahi i nga whakamatautau whakararo penei i te tuhi whakamuri, PCR, RT-PCR, PCR wa-tuturu, raupapa-whakatupuranga (NGS), me te Northern blot.
Nga tikanga rokiroki
Rokiroki i te 15 ~ 25 ℃, ka kawe i te pāmahana rūma
Waehanga
| Waehanga | 100RXNS |
| Pupuri VL | 50 ml |
| Kaipupuri RW | 120 ml |
| RNase-kore ddH2 O | 6 ml |
| Nga Tiwae RNA FastPure | 100 |
| Ngongo Kohinga (2ml) | 100 |
| Ngongo Kohinga RNase-kore (1 .5ml) | 100 |
Pūrei VL:Whakaratohia he taiao mo te lysis me te here.
Pupuri RW:Tango i te toenga pūmua me ētahi atu poke.
RNase-kore ddH2O:Whakamutua te DNA/RNA mai i te kiriuhi kei roto i te pou hurihuri.
Ngā Tīwae RNA Tere:Whakakotahitia te DNA/RNA.
Ngongo Kohinga 2 ml:Kohikohi filtrate.
Ngongo Kohinga RNase-kore 1.5 ml:Kohikohi DNA/RNA.
Nga tono
Ko nga putea nasopharyngeal, ko te taiao o te taiao, ko te tipu o te ahurea pūtau, me te kopa homogenate.
Mater whaiaro-whakariteials
Nga tohutohu paipa kore- RNase, 1.5 ml RNase-kore ngongo centrifuge, centrifuge, vortex mixer, me nga pipette.
Tukanga Whakamatau
Mahia nga mahi katoa e whai ake nei i roto i te rūnanga haumaru koiora.
1. Taapirihia te 200 μl o te tauira ki te ngongo centrifuge RNase-kore (whakaritea ki te PBS me te 0.9% NaCl mena he iti rawa te tauira), whakauruhia te 500 μl o Buffer VL, uru pai ma te vortexing mo te 15 - 30 hekona, me te centrifuge poto ki te kohikohi i te ranunga ki raro o te ngongo.
2. Whakanohoia nga Tiwae RNA FastPure ki roto i te Kohinga Kohinga 2 ml.Whakawhitihia te ranunga mai i te Hipanga 1 ki te FastPure RNA Columns, centrifuge i te 12,000 rpm (13,400 × g) mo te 1 min, ka makahia te filtrate.
3. Tāpirihia te 600 μl o te Buffer RW ki te FastPure RNA Columns, centrifuge i te 12,000 rpm (13,400 × g) mo te 30 hēkona, ka makahia te filtrate.
4. Whakahokia te Hipanga 3.
5. Purihia te poupou kore i te 12,000 rpm (13,400 × g) mo te 2 min.
6. Me ata whakawhitia nga Tiwae RNA FastPure ki roto i te Kohinga Kohinga kore utu RNase hou 1.5 ml (kua whakaratohia i roto i te kete), me te taapiri i te 30 - 50 μl o te RNase-kore ddH2O ki te pokapū o te kiriuhi me te kore e pa ki te pou.Tukua kia tu i te pāmahana rūma mo te 1 meneti me te centrifuge i te 12,000 rpm (13,400 × g) mo te 1 min.
7. Makahia nga Tiwae RNA FastPure.Ka taea te whakamahi tika i te DNA/RNA mo nga whakamatautau ka whai ake, ka rongoa ranei ki te -30~ -15°C mo te wa poto, -85 ~-65°C ranei mo te wa roa.
Notes
Mo te whakamahi rangahau anake.Kaua e whakamahia i roto i nga tikanga tātaritanga.
1. Whakaritea nga tauira ki te pāmahana rūma i mua.
2. He tino hopuhopu nga huaketo.Me whakarite nga whakaritenga haumaru katoa i mua i te whakamatautau.
3. A ape i te whakatio me te whakamaroketanga o te tauira, na te mea tera pea ka paheke, ka heke ranei te hua o te DNA/RNA viral kua tangohia.
4. Ko nga taputapu kua oti te whakarite-whaiaro ko nga tohutohu pipette kore utu RNase, 1.5 ml RNase-kore ngongo centrifuge, centrifuge, vortex mixer, me nga pipettes.
5. I te wa e whakamahi ana i te kete, kakahuria he koti taiwhanga, karapu taherapa tuku, me te kaare karekau me te whakamahi i nga taonga pau kore RNase hei whakaiti i te tupono o te poke o te RNase.
6. Mahia nga hikoinga katoa i te pāmahana rūma mena kaore i tohua.
Hangaia me te Rerenga Mahi
