Whānui SYBR GREEN qPCR Premix (Kōrangi)
Cat Nama: HCB5041B
Ko te Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) he otinga-mua mo te 2×te wa-pono te whakanui PCR ine e tohuhia ana e te tino aro nui me te motuhake, he puru te tae, me te whai hua o te tauira taapiri taapiri.Ko te waahanga matua o te Taq DNA polymerase e whakamahi ana i te tiimata wera antibody ki te aukati i te whakakaha kore-motuhake na te mea i te whakamaarama tuatahi i te wa o te whakarite tauira.I te wa ano, ka taapirihia e te tauira nga mea whakatairanga hei whakapai ake i te kaha whakakaha o te tauhohenga PCR me te whakaorite i te whakakaha o nga ira me nga momo GC rereke (30 ~ 70%), kia taea ai te PCR ine te whiwhi hononga pai i roto i te whanui ine. rohe.Kei roto i tenei hua te tae motuhake ROX Passive Reference, e tika ana ki te nuinga o nga taputapu qPCR.Kaore e tika ki te whakatika i te kukū o ROX i runga i nga taputapu rereke.He mea tika ki te taapiri i nga timatanga me nga tauira hei whakarite i te punaha tauhohenga mo te whakakaha.
Waehanga
Universal Blue qPCR Master Mix
Nga tikanga rokiroki
Ka tukuna te hua me nga kete hukapapa ka taea te rongoa ki te -25 ℃~ -15 ℃ mo te 18 marama.He mea tika ki te karo i te kaha o te rama marama i te wa e rongoa ana, e whakarite ana ranei i te punaha tauhohenga.
Whakatakotoranga
| Te aro | 2× |
| Tikanga rapu | SYBR |
| Tikanga PCR | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Momo tauira | DNA |
| Nga taputapu tono | Ko te nuinga o nga taputapu qPCR |
| Momo hua | SYBR premix mo te PCR ine ine-wa-tūturu |
| Hoatu ki (tono) | Whakaaturanga Ira |
Tohutohu
1.Pūnaha Tauhohenga
| Waehanga | Volome(μL) | Volome(μL) | Te Whakamutunga Whakamutunga |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Pūmua Whakamua (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| Pūmua Whakamuri (10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | ki te 50 | ki te 20 | - |
[Tuhipoka]: Whakaranuhia i mua i te whakamahi kia kore ai nga mirumiru nui mai i te wiri kaha.
a) Te kukū tuatahi: Ko te 0.2μmol/L te kukū tuatahi, ka taea hoki te whakatika i waenga i te 0.1 me te 1.0μmol/L ina tika.
b) Te kukū o te tauira: Mena he otinga kararehe cDNA te tauira, kaua e neke ake i te 1/10 o te katoa o te ruri o te tauhohenga qPCR.
c) Te waimeha tauira: E taunaki ana kia waimeha i te otinga kararehe cDNA kia 5-10 nga wa.He pai ake te rahinga tino pai o te tauira taapiri ina 20-30 huringa te uara Ct ma te whakakaha.
d) Pūnaha tauhohenga: E taunaki ana kia whakamahia te 20μL, 50μL ranei hei whakarite i te whai huatanga me te tukuruatanga o te whakakaha ira ira.
e) Whakaritenga Pūnaha: Whakapaia koa i roto i te pae tino ma me te whakamahi i nga tohutohu me nga ngongo tauhohenga kaore he toenga karihi;e taunaki ana kia whakamahia nga tohutohu me nga kaata tātari.A ape i te paheketanga whakawhiti me te poke aerosol.
2.Hotaka tauhohenga
Papatono Paerewa
| Huahi huringa | Temp. | Te wa | Nga huringa |
| Te whakahekenga tuatahi | 95℃ | 2 min | 1 |
| Te whakahekenga | 95℃ | 10 hēkona | 40 |
| Whakawhanaunga/Torohanga | 60 ℃ | 30 hēkona★ | |
| Te wahanga pihi rewa | Taputapu Taunoa | 1 | |
Papatono Tere
| Huahi huringa | Temp. | Te wa | Nga huringa |
| Te whakahekenga tuatahi | 95℃ | 30 hēkona | 1 |
| Te whakahekenga | 95℃ | 3 hēkona | 40 |
| Whakawhanaunga/Torohanga | 60 ℃ | 20 hēkona★ | |
| Te wahanga pihi rewa | Taputapu Taunoa | 1 | |
[Tuhipoka]: He pai te kaupapa tere mo te nuinga o nga ira, a ka taea te whakamatautau i nga kaupapa paerewa mo nga ira hanganga tuarua matatini takitahi.
a) Te mahana me te wa whakangao: Whakaritea kia rite ki te roa o te ira tuatahi me te ira.
b) Ko te whiwhi tohu korikori (★): Whakatakotoria te tikanga whakamatautau kia rite ki nga whakaritenga i roto i nga tohutohu mo te whakamahi i te taputapu.
c) Anau rewa: Ka taea te whakamahi i te papatono taunoa.
3. Te Tirohanga Hua
Ko te iti rawa kia toru nga tauira koiora i hiahiatia mo nga whakamatautau ine.I muri i te tauhohenga, me whakau te pihi whakakaha me te rewa.
3.1 Anau Whakanui:
Ko te kurupae whakakaha paerewa he ahua-S.He tino tika te tātari ine ina taka te uara Ct i waenga i te 20 me te 30. Mena he iti iho te uara Ct i te 10, me waimeha te tauira me te whakahaere ano i te whakamatautau.I te wa kei waenganui i te 30-35 te uara Ct, he mea tika ki te whakanui ake i te kukū tauira, te rōrahi ranei o te punaha tauhohenga, kia pai ake ai te kaha whakakaha me te whakarite i te tika o te tātaritanga hua.Ina nui ake te uara Ct i te 35, kaore e taea e nga hua whakamatautau te tātari ine ine te korero o te ira, engari ka taea te whakamahi mo te tātaritanga kounga.
3.2 Te ānau rewa:
Ko te tihi kotahi o te pihi rewa e tohu ana he pai te tauhohenga tauhohenga ka taea te mahi tātari ine;Mena ka whakaatuhia e te pihi rewa nga tihi takirua, maha ranei, kaore e taea te tātari ine.E whakaatu ana te kurupae rewanga i nga tihi rua, a he mea tika ki te whakawa mena he dimer tuatahi te tihi kore-whaainga, he whakakaha kore-motuhake ranei na te DNA agarose gel electrophoresis.Mēnā he dimer tuatahi, e tūtohu ana kia whakaitihia te kukū tuatahi, hoahoa ano ranei i nga kaupapa tuatahi me te kaha o te whakakaha.Mēnā he whakakaha kore-motuhake, tēnā whakanuia te pāmahana whakaene, hoahoa anō rānei i ngā pūmua me te motuhake.
Notes
Tena koa mau nga PPE e tika ana, penei i nga koti taiwhanga me nga karapu, hei whakarite i to hauora me to haumaru！
Ko tenei hua mo te rangahau ANAKE!
