2×Rapid Taq Super Mix
Cat Nama: HCR2016A
Ko te 2×Rapid Taq Super Mix kei runga i te Taq DNA Polymerase kua whakarereketia, me te taapiri i te tauwehenga toronga kaha, te mea whakarei ake me te punaha papaa pai, me te tino kaha o te whakakaha.Ko te tere whakakaha o nga tauira matatini penei i te genome i roto i te 3 kb ka tae ki te 1-3 hekona/kb, ko te o nga tauira ngawari penei i te plasmids i roto i te 5 kb ka tae ki te 1 hekona/kb.Ka taea e tenei hua te whakaora i te wa urupare PCR.I te wa ano, kei roto i te ranunga te dNTP me te Mg2+, ka taea te whakanui ake ma te taapiri i nga tohu tuatahi me nga tauira, he mea tino ngawari hoki nga mahi o te whakamatautau.I tua atu, kei roto i te ranunga te waikano tohu electrophoretic, ka taea te electrophoresis tika i muri i te tauhohenga.Ko te kaihoko whakamarumaru o tenei hua ka mau tonu te ranunga i muri i te whakatio me te rewa.Ko te roopu 3'-mutunga A o te hua PCR ka taea te kati ki roto i te vector T.
Waehanga
2×Rapid Taq Super Mix
Nga Tikanga Rokiroki
Me penapena nga hua PCR Master Mix ki te -25~-15 ℃ mo te 2 tau.
Whakatakotoranga
| Whakatakotoranga hua | Rapid Taq Super Mix |
| Te aro | 2× |
| Tīmata wera | Hanga-i roto i te Hot Start |
| Irirangi | 3′-A |
| Te tere tauhohenga | tere |
| Rahi (Hua Whakamutunga) | Tae atu ki te 15 kb |
| Nga tikanga mo te kawe | Te hukapapa maroke |
Tohutohu
1. Pūnaha Tauhohenga (50 μL)
| Waehanga | Rahi (μL) |
| DNA tauira* | e tika ana |
| Tuatahi whakamua (10 μmol/L) | 2.5 |
| tuatahi whakamuri (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×Rapid Taq Super Mix | 25 |
| ddH2O | ki te 50 |
2.Kawa Whakanui
| Nga hikoi hurihanga | Paemahana (°C) | Te wa | Nga huringa |
| Tuhinga o mua | 94 | 3 min | 1 |
| Te whakahekenga | 94 | 10 hēkona |
28-35 |
| Te whakaene | 60 | 20 hēkona | |
| Toronga | 72 | 1-10 hekona/kb |
E taunaki ana kia whakamahia nga tauira rereke:
| Momo tauira | Waahanga awhe whakamahi (50 μL pūnaha tauhohenga) |
| DNA genomic ranei E. coli wai | 10–1,000 ng |
| Plasmid, te DNA viral ranei | 0.5-50 ng |
| cDNA | 1-5 µL (kaua e neke ake i te 1/10 o te tapeke o te rōrahi o te tauhohenga PCR) |
| E taunaki ana kia whakamahia nga tauira rereke | |
Tuhipoka:
1.Te whakamahi Reagent: tino rewa ka uru i mua i te whakamahi.
2. Paemahana whakahiato: Ko te pāmahana whakahiato te uara Tm ao, ka taea hoki te whakarite 1-2 ℃ iti iho i te uara Tm tuatahi.
3. Te tere toronga: Whakaritea te 1 hekona/kb mo nga tauira matatini penei i te genome me te E. coli i roto i te 1 kb;whakaritea te 3 hekona/kb mo nga tauira matatini penei i te 1-3 kb genome me te E. coli;whakaritea te 10 hekona/kb mo nga tauira matatini mo te 3 kb genome me te E. coli.Ka taea e koe te whakarite i te uara ki te 1 hekona/kb mo te tauira ngawari penei i te plasmid iti iho i te 5 kb, 5 hekona/kb mo te tauira ngawari penei i te plasmid i waenga i te 5 me te 10 kb, me te 10 hekona/kb mo te tauira ngawari. penei i te plasmid nui ake i te 10 kb.
Notes
1. Mo to haumaru me to hauora, mauhia nga koti taiwhanga me nga karapu tuku mo te mahi.
2. Ko tenei hua mo te rangahau ANAKE!
